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一种脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽的制备方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
李安平;钟政昌;杨玉蓉;解明昱
申请/专利权人:
中南林业科技大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-03-07
申请/专利号:
CN201910172267.1
公开时间:
2019-05-21
公开号:
CN109777849A
主申请人地址:
410004 湖南省长沙市韶山南路498号
申请地区:
湖南
机构署名:
本校为第一完成单位
主权项:
1.一种脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)压榨脱油:将桃仁去壳剥皮后破碎,过筛,蒸炒,冷榨,得到桃仁饼粕; (2)蛋白提取:将步骤(1)所得桃仁饼粕粉碎,过筛,按1︰15~20的料液比加去离子水混合形成悬浮液,调成碱性溶液后进行磁力搅拌,第一次离心,得到上清液;将上清液调成酸性溶液,第二次离心,得到沉淀物,冷冻干燥,得桃仁提取蛋白; (3)蛋白酶解:将步骤(2)所得的桃仁提取蛋白加去离子水配制成4~5%的桃仁提取蛋白分散液,用嗜热菌蛋白酶对桃仁提取蛋白进行酶解,酶解完成后进行沸水浴加热灭活,得桃仁提取蛋白酶解液; (4)超滤分离:将步骤(3)所得的桃仁提取蛋白酶解液进行超滤分离,通过与硫酸奎宁配制的标准苦味对比,得到分子量大于5000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分、分子量为3000~5000Da高苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分、分子量为1000~3000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分和分子量小于1000Da的低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分; (5)类蛋白反应:将步骤(4)分离的分子量为3000~5000Da高苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分加去离子水配制成质量浓度为35~40%的高苦味桃仁提取蛋白酶解多肽液,用proteAX蛋白酶进行类蛋白反应,反应完成后进行沸水浴加热灭活,得到分子量为3000~5000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽液组分; (6)离心沉淀:将步骤(5)所得的低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽液组分按质量百分比加入10~12 %的三氯乙酸,混合均匀后静置20~25min,低温离心,取上清液,得到分子量为3000~5000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽液; (7)组分混合:将步骤(6)所得的分子量为3000~5000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽液与分子量大于5000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分、分子量为1000~3000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分和分子量小于1000Da低苦味桃仁提取蛋白酶解多肽组分混合均匀,形成混合桃仁提取蛋白酶解多肽液; (8)接种发酵:将黑曲霉孢子悬浮液和米曲霉孢子悬浮液混合形成的混合发酵液按照多肽液质量的3~8%接种入步骤(7)所得混合桃仁提取蛋白酶解多肽液中在30~35℃条件下进行发酵处理48~72h,发酵结束后所得发酵液进行沸水浴加热灭活,经孔径0.20~0.80微米滤膜过滤,滤液即为脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽液; (9)冷冻干燥:将步骤(8)所得脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽液置于真空冷冻干燥机内的冷冻干燥结束后所得粉末即为脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽成品。 2.根据权利要求1所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(1)中,所述过筛为过10目筛;所述蒸炒为在80~90℃的温度条件下翻炒10~15min;所述冷榨是在温度为45~55℃条件下采用双螺旋榨油机机械榨油。 3.根据权利要求1或2所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(2)中,所述过筛为过100目筛;所述碱性溶液的pH为10~11;所述磁力搅拌于40~45℃条件下搅拌90~100min;所述第一次离心的条件是转速为10000~12000r/min,持续15~20min;所述酸性溶液的pH为5.0~5.5;所述第二次离心的条件是转速为12000~15000r/min,持续15~20min。 4.根据权利要求1或2或3所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(3)中,所述嗜热菌蛋白酶进行酶解的条件为:嗜热菌蛋白酶的酶活为50U/mg,加酶量为3500~4000U/g,溶液pH为6.5~7.0,酶解温度为40~45℃,时间为6~7h;所述沸水浴加热灭活的时间为20~30min。 5. 根据权利要求1~4之一所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(6)中,所述低温离心的条件是离心速度为12000~15000 r/min,离心时间为15~20min,温度为3~5℃。 6.根据权利要求1~5之一所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(8)中,所述黑曲霉孢子悬浮液和米曲霉孢子悬浮液混合发酵液由以下方法制成:分别将活化的黑曲霉和米曲霉孢子接种在斜面培养基上,在30~35℃条件下培养72~96h,然后用生理盐水分别将培养的黑曲霉和米曲霉孢子洗脱,接着将两种孢子洗脱液混合均匀形成悬浮液;在无菌操作台用纱布过滤悬浮液以除去悬浮液中的菌丝体,调节黑曲霉孢子悬浮液浓度为4×108~1×107CFU/mL,米曲霉孢子悬浮液浓度为1×107~2×106CFU/mL,将两者混合形成混合发酵液,置于3~4℃条件下保存备用。 7.根据权利要求1~6之一所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(8)中,所述米曲霉孢子为米曲霉CICC2014,黑曲霉孢子为黑曲霉CICC2106。 8.根据权利要求1~7之一所述的脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽,其特征在于,步骤(9)中,冷冻干燥时真空冷冻干燥机内的液面高度为1.5~2.0cm,在-20~-25℃下预冷20~24h,干燥时间为20~24h。
摘要:
一种脱苦桃仁提取蛋白酶解多肽的制备方法,包括以下步骤:(1)压榨脱油;(2)蛋白提取;(3)蛋白酶解;(4)超滤分离;(5)类蛋白反应;(6)离心沉淀;(7)组分混合;(8)接种发酵;(9)冷冻干燥。本发明采用嗜热菌蛋白酶酶解桃仁提取蛋白形成苦味较低的酶解液,然后用超滤方法将苦味较重的组分分离出来,然后在特定蛋白酶的作用下产生类蛋白反应,将苦味的疏水类蛋白形成沉淀,再经离心除去,接着将各分子量多肽组分合并,接入米曲霉和黑曲霉发酵,通过发酵的方法将苦味进一步消除。本发明制备的脱苦桃仁蛋白酶解多肽属于氨基酸营养强化剂,口感佳,无苦涩味,品质好,相比蛋白质更利...

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