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拟南芥突变体的原生质体在分析信号转导途径中的应用

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成果类型:
专利
发明/设计人:
李宁;黄黎君;缪文卓;江文翰;彭明博;...
申请/专利权人:
中南林业科技大学
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-11-27
申请/专利号:
CN201911178502.2
公开时间:
2020-03-13
公开号:
CN201911178502.2
主申请人地址:
410004 湖南省长沙市韶山南路498号
申请地区:
湖南
代理人:
闫书宁
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种分析信号转导途径的方法,为采用拟南芥突变体的原生质体分析信号转导途径。 2.如权利要求1所述方法,其特征在于:“采用拟南芥突变体的原生质体分析信号转导途径”的步骤如下: (1)构建蛋白融合报告基因表达载体、效应载体和内部对照载体; 蛋白融合报告基因表达载体中含有表达盒甲,表达盒甲从5’至3’依次包括启动子甲、编码蛋白标签甲的核苷酸序列、目的蛋白甲的编码基因和萤火虫荧光素酶的编码基因;蛋白融合报告基因表达载体表达含有蛋白标签甲的融合蛋白;融合蛋白由目的蛋白甲和萤火虫荧光素酶组成; 效应载体中含有表达盒乙,表达盒乙从5’至3’依次包括启动子乙、编码蛋白标签乙的核苷酸序列和目的蛋白乙的编码基因;效应载体表达含有蛋白标签乙的目的蛋白乙; 内部对照载体中含有表达盒丙,表达盒丙从5’至3’依次包括启动子丙和海肾荧光素酶的编码基因;内部对照载体表达海肾荧光素酶; (2)完成步骤(1)后,将蛋白融合报告基因表达载体、效应载体和内部对照载体在拟南芥突变体的原生质体中瞬时表达,然后分析信号转导途径。 3.如权利要求2所述方法,其特征在于: 启动子甲、启动子乙或启动子丙为UBQ10启动子; 蛋白标签甲或蛋白标签乙为HA蛋白标签、Flag蛋白标签、Myc蛋白标签或His蛋白标签。 4.一种试剂盒,其含有权利要求2或3中所述蛋白融合报告基因表达载体、所述效应载体和所述内部对照载体中的至少一个;所述试剂盒的用途为分析信号转导途径。 5.如权利要求4所述试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还含有拟南芥突变体的原生质体。 6.转染了权利要求2或3中所述蛋白融合报告基因表达载体、所述效应载体和所述内部对照载体的拟南芥突变体的原生质体。 7.a1)或a2)或a3)或a4): a1)拟南芥突变体的原生质体在分析信号转导途径中的应用; a2)权利要求2或3中所述蛋白融合报告基因表达载体、所述效应载体和所述内部对照载体在分析信号转导途径中的应用; a3)权利要求4或5所述试剂盒在分析信号转导途径中的应用; a4)转染了权利要求2或3中所述蛋白融合报告基因表达载体、所述效应载体和所述内部对照载体的拟南芥突变体的原生质体在分析信号转导途径中的应用。 8.如权利要求1至3任一所述方法、或、权利要求4或5所述试剂盒、或、权利要求6所述原生质体、或、权利要求7所述应用,其特征在于:所述信号转导途径为激素信号转导途径。 9.如权利要求8所述方法、试剂盒、原生质体或应用,其特征在于:所述拟南芥突变体为激素合成途径关键基因缺失的拟南芥突变体、激素信号转导通路关键基因缺失的拟南芥突变体或激素合成途径或信号转导途径同时缺失的拟南芥突变体。 10.如权利要求1、2、3、8或9所述方法、或、权利要求4、5、8或9所述试剂盒、或、权利要求7至9任一所述应用,其特征在于:所述分析信号转导途径为如下d1)至d3)中的至少一种: d1)分析信号转导途径的组分; d2)分析信号转导途径中组分的相互作用; d3)分析或筛选信号转导途径的调控物质。
摘要:
本发明公开了拟南芥突变体的原生质体在分析信号转导途径中的应用。分析信号转导途径的步骤为:(1)构建蛋白融合报告基因表达载体、效应载体和内部对照载体;蛋白融合报告基因表达载体表达含有蛋白标签甲的融合蛋白;融合蛋白由目的蛋白甲和萤火虫荧光素酶组成;效应载体表达含有蛋白标签乙的目的蛋白乙;内部对照载体表达海肾荧光素酶;(2)将蛋白融合报告基因表达载体、效应载体和内部对照载体在拟南芥突变体的原生质体中瞬时表达,然后分析信号转导途径。本发明为拟南芥原生质体中植物激素信号通路的重建和研究提供了一种新的策略,具有重要的应用价值。

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