期刊论文

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中南林业科技大学学报

1673-923X

2014

34

6

61-65,80

10.14067/j.cnki.1673-923x.2014.06.019

:“十二五”国家科技支撑项目“楸树和赤皮青冈珍贵用材林定向培育技术研究 (2012BAD21B03):示范”

本校为第一机构

为建立适宜于赤皮青冈ISSR分析的扩增体系,以赤皮青冈叶片基因组DNA为材料,采用单因素和正交设计相结合的方法系统地测试模板DNA、Mg~(2+)、引物、磷酸碱基脱氧核苷(dNTPs)浓度,Taq DNA聚合酶用量和退火温度这6个因素对ISSR-PCR反应结果的影响。综合分析表明:优化后的最佳反应体系为20μL反应总体系中,含20 ng模板DNA,2.5 mmoL/L Mg~(2+),0.2 mmoL/L dNTPs,1.0 U Taq DNA聚合酶,0.2μmoL/L引物;UBC 808号作引物最佳退火温度为59.3℃。这一优化体系的建立为进一步开展赤皮青冈遗传多样性的ISSR分析奠定了基础。

In order to establish the optimal system of ISSR-PCR for Cyclobalanopsis gilva, with the genomic DNA of C.gilva leaves as material, single factor test and orthogonal experiment design were used to systematically test six parameters of ISSR-PCR which include template DNA, Mg2+, primers, dNTPs concentration, dose of Taq DNA polymerase and annealing temperature.Integrated analysis implies that the optimal reaction system of ISSR (20μL) is:20 ng template DNA, 2.5 mmoL/L Mg2+, 0.2 mmoL/L dNTPs, 0.2 μmoL/L primers and 1.0 U Taq DNA polymerase, if U...