期刊论文

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中南林业科技大学学报

1673-923X

2008

28

1

44-48

10.3969/j.issn.1673-923X.2008.01.019

长沙市科技计划重点项目（K069083-22）部分研究内容；

本校为第一机构

模板DNA、引物、dNTPs、Mg~(2+)的浓度,Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增(ISSR-PCR)结果的主要因素.以桉树叶片基因组DNA为试材,系统地测试了这6个因素对桉树ISSR反应结果的影响.结果表明;最优化的反应体系即20μL反应体系中,含20 ng模板DNA、0.4 μmol·L~(-1)随机引物、0.15 mmol·L~(-1) dNTPs,2.0 mmol·L~(-1)Mg~(2+)、1.25 U Taq DNA聚合酶.最佳退火温度为55℃;PCR反应程序为94 ℃预变性5 min; 94 C变性45 s,55 ℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃再延伸7 min.

Template DNA, primers, dNTPs, Mg^2＋ concentration, dose of Taq DNA polymerase and annealing temperature are primary factors to ISSR-PCR. With the genomic DNA of Eucalyptus leaves as material, the six factors were systematically analyzed. The result shows that the optimal reaction system of ISSR is the 20μL system containing 20 ng template DNA, 0.4 μmol· L^-1 random primers, 0. 15 mmol· L^-1 dNTPs, 2. 0 mmol·L^-1Mg^2＋, and 1. 25 U Taq DNA polymerase; and that the optimized annealing temperature is 55℃, the PCR procedure is ： pre-denatur...